如果乐队没有出现在Western Blot中，可能会出现什么问题？

回答：

许多…

有许多原因可能导致蛋白质印迹不出现。样本和抗体组合过去是否有效？

以下是我可以想到的一些可能导致乐队不出现的情况：

蛋白质是否从凝胶中转移出来？尝试用ponceau S或amido black等染色膜，看看是否存在这些条带。有时候，你可以通过润湿它并将光线保持在一定角度来看到膜上的蛋白质条带。
第一抗体是否有效？这是一个很难测试的方法，唯一的方法是通过包含一个阳性对照，你知道你有感兴趣的蛋白质存在。如果您有一些感兴趣的蛋白质，您可以尝试将其点到Western印迹膜上（即您没有运行凝胶），看看如果你处理膜就好像它是一个蛋白质印迹，你会得到一个结果。
二抗是否识别一抗？再次，一个艰难的测试。关于你唯一可以做的测试是2中提到的现场测试。
“检测系统”是否有效？根据您使用的检测方法，您可以尝试掺入一些二抗，以查看检测溶液以及二抗上的触发剂/酶是否有效。也就是说，你能用二抗引发反应吗？

最后，它可能很简单，因为在探测错误的情况下使用的解决方案之一。例如，如果缓冲液中的盐浓度是错误的，那么这可能导致抗体从印迹中释放出来。如果缓冲液的pH值不正确，也会发生同样的情况。

我个人经历的西方印迹无法工作的“最奇怪”的原因是我们改变了用于阻断膜的奶粉供应商。来自新供应商的粉末含有磷酸酪氨酸磷酸酶，其除去了我们试图用我们的抗磷酸酪氨酸抗体检测的所有磷酸基团。