在ELISA测试中,一抗和二抗有什么作用?

在ELISA测试中,一抗和二抗有什么作用?
Anonim

回答:

这取决于ELISA测定的类型。

说明:

ELISA =酶联免疫吸附测定。

有不同类型的ELISA检测。你需要的是:

  • 带有酶的抗体
  • 抗体结合的抗原
  • 酶的底物,引起可测量的反应

附着在抗体上的通常是HRP(辣根过氧化物酶)。 HRP可以与不同的基底反应,这些基底可以改变颜色或发光,两者都是可测量的。

该图显示了该概述 不同种类 ELISA分析。我将解释它们如何在下面工作。

直接ELISA

用抗原(Ag)和a涂覆平板 一抗 加入酶。当加入底物时,反应将发生并与抗体 - 抗原相互作用的量成比例。

间接ELISA

再次,用抗原和a涂覆平板 一抗 与抗原结合。一个 secundary抗体 加入后与第一抗体结合。第二抗体含有与底物反应的酶。

夹心ELISA

这里涉及两种或三种抗体。捕获抗体附着于板并与抗原结合。接下来是与直接(仅一种抗体)或间接方法(两种抗体)相同的步骤。

竞争ELISA

有时称为抑制ELISA,有点复杂。用待研究的抗原包被板。一个 一抗 首先将酶与具有未知浓度的相同抗原的样品一起温育。然后将其加入板中,使得仍然可以自由地与板上的抗原反应的抗体。在洗掉样品的抗体 - 抗原复合物后,加入底物。

当未知样品含有大量抗原时,将有更少的抗体自由结合至平板=较低的信号。