为什么我们在PCR中使用阴性对照?

为什么我们在PCR中使用阴性对照?
Anonim

回答:

见下文

说明:

PCR在模板DNA上起作用。假设您正在测试HIV(HIV是一种RNA病毒,但当它进入细胞时,它会变成DNA ……因此感染细胞中会有HIV DNA)。您使用的引物将产生与HIV DNA的一部分相对应的产物(扩增子)。如果你看到这个扩增子,那么你就会出现HIV序列…..但如果你没有阴性对照,你可能会受到污染。

PCR非常敏感。 PCR中有许多解决方案(水,缓冲液,dNTPs,酶)……所有这些溶液很容易被其他样品中的DNA污染,甚至是昨天你所做反应中产生的扩增子。因此,如果您有患者X的DNA样本,并且您正在通过PCR检查HIV,那么PCR引物可能会从患者X的DNA样本(如果该人患有HIV)中的HIV DNA中产生一种产物,或者它可能使其脱离污染。但你无法分辨它是来自患者DNA中的污染还是来自HIV。

所以你运行水控制。管1放置反应的所有组分,对于DNA,你只需加水。这是消极对照。什么都不应该放大。在Tube 2中,您将所有反应组分和Patient X的DNA放入。如果你在这里得到一个产品,(管1中没有任何东西),患者X可能在他/她的DNA中含有HIV DNA。如果您在Tube 1和Tube 2中都有产品,则存在污染问题,您无法判断患者样本中的HIV是来自疾病还是来自污染。

因此,您总是运行水控制(水代替DNA)。