为什么使用免疫印迹来证实elisa? +示例

为什么使用免疫印迹来证实elisa? +示例
Anonim

回答:

通常,这是抗体特异性测试。

说明:

在ELISA中,很难判断您的抗体是否与您感兴趣的蛋白质,完全不同的蛋白质或一系列蛋白质结合。

Western印迹将用于检查抗体的特异性(您应该注意蛋白质印迹可能无法检测到所有与不正确蛋白质的交叉反应)。

在蛋白质印迹中,您可以看到抗体结合的蛋白质的大小(您不能在ELISA中)。因此,例如,如果您的抗体应该与56 kDa的蛋白质结合,并且您在印迹上看到约56 kDa的条带,那么您可以合理地确信该抗体与正确的蛋白质结合。

另一方面,如果您看到32 kDa的条带,您可以得出结论抗体与错误的蛋白质结合。同样地,如果在Western印迹上出现许多条带,则表明(在没有蛋白质降解的情况下)抗体与一系列不同的蛋白质结合。

在凝胶上出现的32kDa条带的实例中,以及多条带,这表明抗体缺乏对ELISA的特异性,并且在ELISA中看到的任何结果可能对目标蛋白质不具有特异性。

如果我进行这种测试,我可能会加入某种“干扰”试剂来测试抗体。例如,如果我已经将我的抗体提高到肽,我可以在第一抗体溶液中包含肽以测试正确的结合。也就是说,在肽存在下,我应该看不到ELISA的结果或没有结果,因为我的第一抗体由于存在过量的肽而不能结合。