为什么在蛋白质纯化过程中使用裂解步骤中的DNase和溶菌酶?

为什么在蛋白质纯化过程中使用裂解步骤中的DNase和溶菌酶?
Anonim

回答:

净化蛋白质组分…

说明:

如果你正在净化一种(通常是特定的)蛋白质,你将需要尽可能多地去除可能与它们绑定的垃圾。

这取决于你所追求的蛋白质的程度,但通常这是一个好主意,特别是在 预备 净化,去除尽可能多的杂质。

1:

由于蛋白质通常很大,并且因此会出现在你的(超速离心)部分的较低条带中,你想要去除任何核酸,特别是如果你正在进行的蛋白质涉及到 POL 1, 逆转录酶 或复制/转录/翻译中涉及的任何其他酶

您可以使用DNAse分离样品中存在的核酸:这将完全将DNA水解成其组成部分。

请注意,有各种DNA酶,它们的基质机制和特异性都不同。根据使用的DNAse,它可以显示 - 要么 - 核酸酶活性……

更重要的是, RNA酶 更合适,因为RNA通常更多地位于蛋白质的浮力/分数范围内,并且可以与蛋白质结合。

2:

溶菌酶 :具有至少两种功能的酶:

它使酶去糖基化:血液中携带的大多数蛋白质都被糖基化:它们附着有少量糖分子。溶菌酶将去除糖残留物。

它还具有分解革兰氏阳性细菌细胞壁的能力 裂解 。 (如果你想从革兰氏阳性菌中纯化蛋白质)

任何降解产品,无论是核酸还是糖碎片,都会出现在离心管的顶部部分,因为它们具有“更轻”的浮力….